•Precisión 98.9% (88/89)
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I. INTRODUCCIÓN
La gripe es una infección viral altamente contagiosa de
las vías respiratorias altas, que es caracterizada por
la variabilidad del antígeno, la estacionalidad y el
impacto sobre la población en general. De los dos
principales sub-tipos de la gripe (A y B), el subtipos
de la gripe A son especialmente diferenciados por la
alta variabilidad de los antígenos de las glicoproteínas
superficiales (hemaglutininas y neuraminidasa). El virus
de la gripe A es el más frecuente y se asocia a las
epidemias más serias. La gripe puede causar
complicaciones severas tales como bronquitis o pulmonía,
particularmente en niños, la gente mayor o adultos con
enfermedad respiratoria crónica. Frecuentemente la
infección viral suave es transmitida por secreciones
respiratorias con el estornudo o toser. Hay muchas otras
infecciones virales que pueden confundirse con la gripe,
haciendo necesario el uso de pruebas de laboratorio para
distinguirla de otras infecciones respiratorias agudas.
Nuevos antivirales eficaces han empezado a aparecer
desde los últimos años 1990, pero estos tratamientos
solamente son eficaces si están administrados
precozmente (antes de 48 h del inicio de la
enfermedad).El aislamiento del virus mediante cultivo
celular todavía es considerado como el método del patrón
oro para la diagnosis de la gripe, con una sensibilidad
de casi 100% después de 3 días. El cuidado médico de los
pacientes y los costes económicos se podían mejorar en
gran medida mediante el empleo de un método de detección
rápido, específico y sensible del antígeno para de esta
manera, permitir el uso de nuevos tratamientos
antivirales.
II. PRINCIPIO DEL TEST
El test consiste en un ensayo Inmunocromatográfico listo
para su uso, basada en partículas de oro coloidal. Este
dispositivo permite detectar el virus de la gripe A y B
en muestras obtenidas a través de torunda, lavados o
aspirados nasofaríngeos o en sobrenadantes de cultivos
celulares. La especificidad del ensayo es obtenida
mediante el empleo de anticuerpos monoclonales dirigidos
contra los antígenos nucleoproteínicos de la gripe A o
B. El dispositivo está formado por dos tiras
individuales, cada una de ellas específica para el tipo
A o para la gripe B que se encuentran unidas por su
parte posterior.El dispositivo muestra dos lados activos
específicos (imagen # 1). Un lado se encuentra
sensibilizado con un anticuerpo monoclonal específico de
para la gripe A (Lado A), mientras que el otro lado esta
sensibilizado con un anticuerpo específico monoclonal
para la gripe B (Lado B). Las lecturas del resultado se
realizan en ambos lados. Cuando la tira se sumerge en la
solución de la muestra, el conjugado presente en cada
una de las membranas situadas en ambos lados de la tira
son solubilizadas, procediendo a emigran junto con la
muestra a lo largo de la superficie de nitrocelulosa. Si
la gripe B está presente en la muestra, se originará
complejo Ag-Ac entre el conjugado Ac+oro coloidal y el
Ag del virus de la Gripe B en el lado de B de la tira.
Si la muestra contiene virus de la gripe A, se producirá
la formación de un complejo Ag-Ac con el conjugado Ac+oro
coloidal presente en la tira A (lado A). En ambos casos,
este complejo Ag-Ac ascenderá a través de la membrana de
nitrocelulosa hasta llegar a la Zona Test, conteniendo
anticuerpos monoclonales específicos y produciendo una
inmuno-fijación del complejo y originando la formación
de una línea rojiza en los primeros 15 minutos. La
solución continúa emigrando hasta encontrar un segundo
reactivo (un anticuerpo Anti-IgG de raton en el lado B y
un anti-IgY de pollo en el lado A) que producirá una
nueva inmuno-fijación del conjugado restante y
visualizándose la formación de una segunda línea de
color rojizo indicando el buen desarrollo del ensayo y
la finalización del mismo.
III. COMPOSICIÓN DEL KIT
1. 25 TIRAS Influ A&B RESPI-STRIP Cada varilla esta
sensibiliza en el lado A con Ac monoclonal anti-influenza
A y con un anticuerpo Anti-IgG de raton y en el lado
B con Ac monoclonal anti-influenza B y con un
anticuerpo Anti-IgY de pollo. Estos conjugados son
deshidratados en sus lados específicos y situados en
la zona inferior de cada varilla. Las varillas–test
son almacenadas en botes conteniendo desecantes
Estas varillas-tests vienen presentadas en un bote
con desecante.
2. Buffer de Dilución (frasco gotero 15 ml) Contiene
solución Tamponada salina a Ph 7.5: (NaN3 < 0,1%),
detergente y compuestos proteínicos.
3. Indicaciones para el uso.
MATERIAL NO SUMINISTRADO - 3 or 5 mL test tubes -
Utensilios de toma de muestras. MATERIAL DISPONIBLE
OPCIONAL - Control Positivo Influenza A&B (C-1092)
IV. PRECAUCIONES ESPECIALES
Todas las operaciones ligadas al uso de este test
deberán de ser realizadas de acuerdo con las Buenas
Prácticas del Laboratorio. oEl test Influ A&B Respi-Strip
es para diagnosis “In Vitro” exclusivamente. oEvitar
tocar directamente con los dedos las tiras de
nitrocelulosa. oEmplear guantes durante la manipulación
de las muestras. oDesechar los guantes, isopos, tubos-test
y tiras sensibilizadas de acuerdo con las GLP (Good
Laboratory Practices). oNunca usar reactivos procedente
de otros kits. oEl frasco conteniendo las tiras
sensibilizadas deberá de cerrarse tan pronto se hayan
obtenido el numero necesario de tiras a utilizar en ese
momento. Dado que estas tiras son sensibles a la
humedad, asegurarse que el sobre conteniendo desecante
se encuentra en su interior. oDos líneas verdes a ambos
lados de la tira indica el lugar de adsorción de los
anticuerpos. Estas desaparecerán durante el transcurso
del test. oDescartar el empleo de la Solución Tamponada
de Dilución si esta se contaminara por bacterias u
hongos. oLa calidad de los reactivos no podrá ser
garantizada una vez sobre-pasada la fecha de caducidad
indicada en el envase o si los reactivos son almacenados
en condiciones inapropiadas.
V. ALMACENAJE Y CONSERVACIÓN
El kit INFLU A&B Respi-Strip, cuando todavía no está
abierto, podrá mantenerse entre 4-30 Cº y usado hasta la
fecha indicada en el envase. Una vez abierto el kit es
estable 15 semanas si se mantienen entre 4º y 30º C. y
en ambiente libre de humedad. No congelar este kit.
Estudios de estabilidad en tiempo real están siendo
llevados a cabo en Coris BioConcept. Los resultados
pueden ser enviados si se necesitan.
VI. SAMPLES.
Las muestras a ensayar se deberán obtener y manipular
según los métodos estándares para la colección de
Aspirado Nasofaríngeo (NPS), lavados nasofaringeos o
torundas de muestras. El uso de los medios del
transporte no se ha validado en el Influ A&B Respi-Strip
1) Las muestras de NPS se deben de ensayar lo más pronto
posible a su recolección. Si es necesario, podrán ser
almacenados en nevera a 2-8 °C hasta 24 horas o -20 °C
por períodos del tiempo más largos nunca exceder de 1
mes. Cerciórese de que las muestras no han sido tratadas
con las soluciones conteniendo formaldehído o derivados.
2) Es altamente recomendable evitar el uso del esputo.
VII PROCEDIMIENTO
Preparación: Si el test INFLU A&B Respi-Strip ha
permanecido a 4 ºC. dejar que todos los reactivos
alcancen la temperatura ambiente antes de iniciar el
ensayo.
Escribir el nombre / número de la muestra en cada tubo-test,
prever un tubo por muestra.
Colocar cada tubo marcado en una gradilla.
PROCEDIMIENTO DEL TEST: No se han comprobado los
resultados con otras muestras que no sean NPS.
Recomendamos el uso de NPS frescas para la obtención de
resultados óptimos
1. Si la muestra a ensayar es líquida, añadir 0,25
ml (8 gotas) de Solución Buffer de Dilución en cada
uno de los tubos y 0,25 ml de muestra a fin de
conseguir un ratio de dilución de ½.
2. Torunda: Las muestras podrán ser almacenadas en
torundas conteniendo medio de transporte o cualquier
dispositivo conteniendo gel o matriz esponjosa.
A)Si la muestra es almacenada sobre una torunda
con medio de transporte líquido deberá de
escurrirse apretando la torunda sobre la pared
del tubo, posteriormente tratar como en el paso
1.
B)Si la muestra es almacenada en una torunda
sobre un medio de transporte No Líquido, deberá
posteriormente introducirse sobre un tubo
conteniendo al menos 0.5 ml de solución salina o
agua destilada y agitar y escurrir la torunda
sobre la pared del tubo, procediendo a analizar
la suspensión obtenida como el paso 1.
3. ?Agitar en un vortex para obtener una buena
homogenización.
4. ?Introducir la tira sensibilizada en la dirección
indicada por las flechas.
5. ?Mantener 15 minutos la tira dentro del tubo
hasta a la finalización de la reacción. Los
resultados deben ser leídos mientras la tira está
húmeda.
Con el fin de evitar la dilución del Conjugado de Oro
Coloidal con la suspensión elaborada, NO SUMERGIR LA
TIRA sensibilizada POR ENCIMA DE LA LÍNEA bajo las
flechas.
VIII. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El lado de la tira de color púrpura es específico del el
Virus de la Gripe A El lado de la tira de color Azul es
específico del Virus de la Gripe B Los resultados serán
interpretados de la siguiente manera:
1 línea = NEGATIVO
2 líneas = POSITIVO
0 líneas = INVALIDADO* *
La ausencia de la “línea de control”, (línea superior de
la tira) significará un Resultado Invalidado y por
tanto, deberá de ser repetido. Para almacenar los
resultados, dejar secar la tira sensibilizada antes de
retirar el material absorbente de su base. Una vez seca,
podría aparecer una tenue sombra alrededor de la línea
test.
IX. CONTROL DE CALIDAD
Positive Control: De acuerdo con las Buenas Prácticas
del Laboratorio, recomendamos la realización de
periódicos controles de calidad de acuerdo con los
requerimientos de cada laboratorio. Para ello Disponemos
de un control positivo para INFLU A&B Respi-Strip
(C-1092) en el cual la tira sensibilizada es
introducida. Cada control positivo debe ser diluido 2x
en el buffer de dilución.
X.CARACTERÍSTICAS
A. Detectabilidad: El nivel de detectabilidad ha
sido evaluado en 1.437X 107 vp/mL para la Gripe A y
4.375 X 107pv/mL para la gripe B.
B. Sensibilidad – Especificidad (correlación): Dos
evaluaciones se han realizado para evaluar la
eficacia del kit.. La Primera ha sido realizada en
115 muestras de torundas y comparadas con otra
prueba rápida comercial de detección de Gripe A y
por Rt-pcr.
C. Repetitividad Para comprobar la exactitud de la
intra-lotes, las mismas muestras positivas y la
solución tampón diluyente han sido procesado 15
veces en tiras del mismo lote de producción bajo las
mismas condiciones experimentales. En Todos los
casos, los resultados observados fueron, según lo
esperado. Para comprobar la exactitud de la inter-lotes,
las mismas muestras positivas y la solución tampón
diluyente han sido procesado 3 lotes diferentes. En
Todos los casos, los resultados observados fueron,
según lo esperado
D. Interferencias: Los patógenos siguientes han sido
probados para buscar reactividades cruzadas
posibles:: Adenovirus, HSV, Parainfluenza,
Enterovirus, Rhinovirus, Nocardia asteroides,
Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis,
Streptococcus pyogenes, Aspergillus niger,
Legionella pneumophila, Candida albicans,
Haemophilus influenzae. También se realizaron
pruebas con el Staphylococcus aureus y se obtuvieron
resultados positivos con altas concentraciones
bacterianas (aproximadamente 109 CFU/mL)
XI. LIMITACIONES DEL KIT
Los resultados obtenidos por INFLU A&B Respi-Strip
deberán de ser comparados con el resto de la información
clínica disponible. Un test positivo no descarta la
presencia de otro patógeno en la muestra. INFLU A&B
Respi-Strip es un test de screenig de la fase aguda.
Muestras de NPS que sean recogidas después de esta fase,
pueden contener concentraciones antigénicas por debajo
del umbral de sensibilidad del reactivo. Si la muestra
produjera un resultado negativo, a pesar de la
observación de síntomas. Se recomendará la realización
de un cultivo para confirmar el resultado. Ultima
actualización de las instrucciones de uso : Noviembre
del 2005 IFU-5412/SP Rev : 00
Productor :
CORIS BIOCONCEPT
Science Park – CREALYS
Tel : +32(0)81.719.917 Rue Jean Sonet 4A Fax :
+32(0)81.7 19.919
B – 5032 GEMBLOUX
E–mail : info@corisbio.com BELGIUM
www.corisbio.com
XII. BIBLIOGRAPHIC REFERENCES
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1. Church, D. L., Davies, H. D. et al. (2002).
“Clinical and economic evaluation of rapid influenza
A virus testing in nursing homes in calgary, Canada.”
Clin Infect Dis 34(6):790-5.
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2. Cox, N. J. and Subbarao, K. (2000). “Global
epidemiology of influenza: past and present.” Annu
Rev Med 51: 407-21.
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Virus. pp. 891-920, in: Clinical Virology. D. D.
Richman, R. J. Whitley and F. G. Hayden, eds.
Washington, ASM Press.
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4. I. Renuart, P. Mertens and T. Leclipteux. 2002.
“An immunochromatographic test for the detection of
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October 2002, Lille, France.
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5. M. Lynch. “Prospective evaluation of an optical
immunoassay for detection of Influenza during the
1999-2000 seasons.”Clinical Virology Laboratory,
Fairview-University Medical Center, University of
Minnesota, Minneapolis, MN.
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6. P. Mertens, S. Degallaix, L. Denorme, C. Olungu,
Th Leclipteux. 2002. “ The Inf A/B TWO SIDED Respi-Strip,
an innovative immunochromatographic device for the
detection of Influenza A and B viruses.” MEDICA,
November 2004, Dusseldorf, Germany.
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