TOXIN-A

(TEST RÁPIDO INMUNO-CROMATOGRÁFICO PARA DETECCIÓN DE LA TOXINA –A  DEL CLOSTRIDIUM  DIFICILE EN MUESTRAS FECALES)

 REF:       225D32002            ( 25 TEST )

               225D32002-10       ( 10 TEST )

               225D32002-05       (  5  TEST )

PROCEDIMIENTO DEL TEST

 ü       Llevar todos los reactivos a temperatura ambiente.

ü       Sacar el dispositivo del envoltorio.

ü       Abrir un tubo de plástico con solución extractora para cada muestra a analizar.

ü       Empleando la pipeta pasteur añadir 6 gotas (ó 200 ml) de solución extractora en el pocillo “A”         del dispositivo de reacción.

ü       Leer los resultados después de 15 minutos de la adicción de la muestra en el dispositivo.

INTRODUCCIÓN

El Clostridium Dificile es el mayor causante de diarreas antibiotico-asociadas y  Colitis pseudomembranosas (1). Es ahora, uno de los patógenos mas comúnmente detectado como causa de infecciones nosocomiales en centros hospitalarios y asistenciales (2,3).

Este organismo ha sido  aislado de diversos hábitats naturales, incluido el suelo, heno, arena, estiércol de diferentes animales (vacas, burros y caballos) y de perros, gatos, roedores y heces humanas (4). El C. Dificile produce al menos  tres factores potencialmente virulentos, de las cuales la toxina A y la toxina B  son las más importantes por su patogénesis asociada a enfermedades por Clostridium Dificile (5).

La Toxina A es una enterotoxina, la cuál  parece ser interfiere en el  citoesqueleto de las células epiteliales intestinales provocando una disfunción del mismo; mientras que la Toxina B es una citotoxina que  inductora de fuertes efectos citopáticos en líneas de cultivos tisulares y celulares (6).

No todas las variedades de Clostridium Dificile producen toxinas y aproximadamente el 2 % de adultos sanos, así como más del 50% de niños mayores  de 2 años pueden estar colonizados por Clostridium Dificile. La  detección de las toxinas (A y B) en muestras fecales en pacientes con diarrea es mucho más significativa que en cultivos bacterianos.

PRINCIPIO         

El test Toxin-A de Fastia es un test  rápido, simple y  altamente sensible para la detección del antígeno de la  Toxina-A del Clostridium Dificile en muestras fecales.

El método emplea una única combinación de conjugado monoclonal marcado con oro coloidal y una fase sólida de anticuerpos  policlonales para identificar toxina A con un alto grado de sensibilidad y especificidad.

Después de dispensar una  porción de muestra en el tubo conteniendo  solución de extracción, esta se disuelve, se añade unas cuantas gotas  de este extracto el pocillo de

muestra “A” del dispositivo de reacción.

La muestra asciende a través del dispositivo absorbente, el conjugado de anticuerpos marcados con el cromógeno se unen al  Ag de la Toxina-A (cuando este presente en la muestra) formando un complejo Ag-Ac _cromógeno.

Este complejo continua fluyendo hasta llegar a una zona donde se encuentran fijados  al dispositivo Ac frente Toxina-A. En esta zona de reacción positiva se formará una banda  color rosada.

El Ag-Ac _cromógeno  continua  avanzando por el dispositivo hasta llegar a una zona de control donde se encuentran anti-anticuerpos fijados en el dispositivo. Esto produciría la formación de una nueva banda roja ó rosácea que nos indicará que el test se ha desarrollado con normalidad.

COMPONENTES DEL KIT

Cada equipo contiene material necesario  para realizar 20 pruebas:

-          20 dispositivos Fastia Toxin-A

-          20 tubos de plástico conteniendo 2 ml de solución de extracción

-          20 pipetas pasteur

-          20 aplicadores.

-          1 hojas de instrucciones

ALMACENAJE Y ESTABILIDAD

Almacenar a temperatura ambiente (4º - 30ºC) en el sobre cerrado, no congelar los equipos.

PRECAUCIONES

1-       Solamente para uso “ In vitro”.

2-       Leer cuidadosamente las instrucciones antes de utilizar los equipos.

3-       No usar posteriormente a la fecha de caducidad que aparece en la etiqueta de la caja.

4-       Todos los reactivos y materiales del kit deberán ser considerados como material potencialmente infeccioso y ser manipulado de acuerdo a las buenas normas de uso en el laboratorio. Al finalizar, este material deberá  ser desinfectados o esterilizados a 121ºC al menos durante 1 hora.

INSTRUCCIONES PARA LA RECOGIDA DE MUESTRAS

NOTA PRELIMINAR:

-          Las muestras fecales deberán ser recogidas lo mas pronto posible al comienzo de la sintomatologia.

-          Muestras diluidas pueden ser almacenadas a 2-8º C durante 3 días sin producirse interferencias con la precisión del ensayo.

-          Para largos periodos de almacenaje, la muestra sin diluir podrá almacenarse a –20ºC. No se recomienda la descongelación de forma repetitiva de las muestras, estas pueden causar resultados erróneos.

-           

-          Atención: NO RECOGER MUESTRAS EN CONTENEDORES QUE CONTENGAN MEDIOS, CONSERVANTES, SUERO ANIMAL O DETERGENTES QUE DE ALGUNA MANERA PUEDAN INTERFERIR CON EL TEST.

PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1-       Escribir nombre del paciente en el tubo de extracción.

2-       Usando el aplicador provisto, recoger una pequeña cantidad, no más grande que un pequeño guisante e introducirlo en el tubo (en caso de muestra sólida)

3-       Si la muestra es líquida transferir 200µl  de muestra en el interior del tubo.

4-       Apretar el tapón y mezclar la muestra fecal y el diluyente agitándolo hasta que la muestra este disuelta.

5-       Poner el tubo en posición  vertical y mantener  hasta la formación de un botón fruto de la sedimentación. Alternativamente puede centrifugarse a 500-1000 r.p.m. durante 1 minuto.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

POSITIVO: Aparece una banda coloreada en la ventana test (B) y en la ventanilla control (C).

NEGATIVO:  Ausencia de banda coloreada en la ventana test (B) apareciendo solamente en la venta control (C).

DUDOSO: Si no aparece visible una banda coloreada en la ventana control (C), el ensayo será dudoso recomendado  repetir el ensayo.

CARACTERISTICAS DEL  TEST

Se realizó un estudio sobre 63 muestras fecales usando Fastia Toxin-A comparándolo con métodos de cultivos celulares y de citotoxicidad.

Todas las muestras  mostraron idéntico resultado empleando tanto métodos de cultivo celular, como cultivos de citotoxicidad.  Así pues, de los valores obtenidos de la tabla 1 podemos hablar de:

                               SENDIBILIDAD:                                86,7%   (13/15)

                               ESPECIFICIDAD:                              91,7%   (44/48)

Comparados con los métodos de citotoxicidad

LIMITACIONES DEL TEST

-          Fastia Toxin-A detecta específicamente antígeno de Toxina A en muestras fecales.

-          En todos los casos, cualquier  procedimiento de diagnostico deberá ser confirmado por el médico con datos obtenidos de otros métodos clínicos.

-          Un resultado negativo, generalmente no excluye una infección por C. Dificile. Esto podría ser causado por la digestión proteolítica de la toxina que origina una inapropiada concentración de esta en la muestra. Si existieran razonables sospechas de la existencia de una infección, se deberá investigar con otra muestra fecal.

-          Un resultado positivo no excluye la presencia de otros patógenos